Preview

Медицинский вестник Юга России

Расширенный поиск

Иммунокомпетентные клетки в ткани спаек пациенток со спаечным процессом в малом тазу

https://doi.org/10.21886/2219-8075-2021-12-3-72-77

Полный текст:

Аннотация

Цель: изучить морфологические особенности и субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток ткани спайки у женщин со спаечным процессом органов малого таза.
Материалы и методы: исследование выполнено на операционном материале, полученном от 70 женщин в возрасте от 23 до 40 лет. Из них 50 образцов ткани перитонеальных спаек от пациенток со спаечным процессом органов в малом тазу I – II степени, которым выполнялся адгезиолизис, и 20 образцов париетальной брюшины от здоровых женщин, которым выполнялась эндоскопическая стерилизация с целью контрацепции или завершения генеративной функции. Применяли гистологический, иммуногистохимический и морфометрический методы исследования.

Результаты: иммунологические изменения в ткани спаек характеризовались активацией Т-клеточного звена иммунитета, что подтверждалось значимым увеличением содержания CD4+ (p<0,001), CD8+ (p<0,001), сдвигом баланса иммунорегуляторных субпопуляций в сторону СD8+, более низким показателем иммунорегуляторного индекса (p = 0,015), недостаточностью гуморального звена иммунитета, а именно отсутствием содержания CD20+на фоне незначительного увеличением пула CD138+.
Выводы: с целью профилактики послеоперационного спаечного процесса в малом тазу у пациенток репродуктивного возраста необходимо применять иммуномодулирующую терапию в раннем послеоперационном периоде, что позволит улучшить результаты хирургического лечения и является патогенетически обоснованным.

Для цитирования:


Пучкина Г.А., Сулима А.Н., Давыдова А.А. Иммунокомпетентные клетки в ткани спаек пациенток со спаечным процессом в малом тазу. Медицинский вестник Юга России. 2021;12(3):72-77. https://doi.org/10.21886/2219-8075-2021-12-3-72-77

For citation:


Puchkina G.A., Sulima A.N., Davidova A.A. Immunocompetent cells in the tissue of adhesives of patients with adhesion process in the small pelvis. Medical Herald of the South of Russia. 2021;12(3):72-77. (In Russ.) https://doi.org/10.21886/2219-8075-2021-12-3-72-77

Введение

Спаечный процесс в малом тазу по-прежнему остается актуальным вопросом оперативной гинекологии. Доказано, что спаечный процесс является осложнением до 90 % всех гинекологических операций [1][2]. Послеоперационные спайки резко снижают качество жизни пациенток [3], приводят к хроническим тазовым болям [4] и бесплодию [5]. В последние годы некоторые исследователи, изучая патогенез спаечного процесса, приходят к заключению, что одним из звеньев спайкообразования является измененная иммунобиологическая реактивность организма [6][7]. Однако до настоящего времени роль иммунной системы в патогенезе спаечного процесса изучена не до конца.

Изучение клеточных механизмов формирования послеоперационных спаек были сосредоточены преимущественно на роли перитонеальных макрофагов, полиморфно-ядерных нейтрофилов и цитокинов [7 – 9]. В ранее выполненных работах доказана ведущая роль Т-лимфоцитов в координации и регулировании хемотаксических ответов при различных инфекционных, аутоиммунных и воспалительных заболеваниях тканей [10 – 12]. Однако имеются единичные экспериментальные исследования [13][14], в которых приводятся данные о значении Т-лимфоцитов в развитии послеоперационного спаечного процесса, недостаточные для однозначных выводов.

В основе иммунных механизмов патогенеза спайкообразования лежат нарушения процессов рекрутирования моноцитов, дифференцирующихся в макрофаги и секретирующих ряд цитокинов, хемокинов и факторов роста, с привлечением клеток гуморального иммунитета – плазмоцитов и их предшественников В-лимфоцитов, – что обусловливает патологическую регенерацию ткани в очаге воспаления [9]. При этом в доступной нам литературе мы не встретили работ, посвящённых изучению роли субпопуляционного состава В-лимфоцитов в развитии послеоперационных спаек. Основываясь на данных о значении иммунной системы в регуляции эксплицированности воспаления и его исхода, мы предположили, что изменение состава и количества экспрессии иммунокомпетентных клеток имеют решающее значение в организации воспалительного процесса, ведущего к развитию послеоперационного спаечного процесса органов малого таза.

Цель исследования – изучение морфологических особенностей и субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток ткани спаек у женщин со спаечным процессом в малом тазу. Исследование одобрено этическим комитетом Медицинской академии имени. С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского» согласно приказа №12/4/107 от 16.06.2021, спланировано и проведено в соответствии с Хельсинской декларацией. Все пациентки со спаечным процессом в малом тазу и здоровые женщины, включённые в исследование, подписали добровольное информированное согласие.

Материалы и методы

Исследование выполнено на операционном материале, полученном от 70 женщин в возрасте от 23 до 40 лет (средний возраст – 36,2 [ 33,1 – 37,2] лет. Из них 50 образцов ткани перитонеальных спаек от пациенток со спаечным процессом в малом тазу I – II степеней (согласно критериям R-AFS), которым выполнялся адгезиолизис, и 20 образцов париетальной брюшины от здоровых женщин, которым выполнялась эндоскопическая стерилизация с целью контрацепции или завершения генеративной функции.

Гистологическое исследование ткани спайки и париетальной брюшины проводили по стандартной методике. Для обзорной оценки структурных особенности тканей применяли окраску гематоксилином и эозином.

Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование ткани выполняли согласно стандартизированной методике с использованием приготовленных микропрепаратов образцов ткани спайки и париетальной брюшины. Идентификацию CD4+, CD8+, CD20+, CD138+-лимфоцитов проводили с использованием панели из чеырёх моноклональных мышиных антител (Clone 4B12 Ready-to-Use, CloneC8/144BReady-to-Use, Clone L26 Ready-to-Use, Clone MI15 Ready-to-Use (компания DAKO)) и системы визуализации NovocastraNovolinkTM на основе компактного полимера NovolinkCompactPolymer™ (Leica, Германия) на иммуногистостейнере BondMax (Leica, Германия). В каждом срезе проводили подсчет абсолютного числа иммунокомпетентных клеток, меченных соответствующими антителами в 10 произвольно выбранных полях зрения при увеличении 400 с помощью программы Soft ware DPSOFT. Перечисляли на 1 мм 2 среза.

Просмотр и фотографирование микропрепаратов осуществляли посредством цифровой камеры OLYMPUSC 5050Z, установленной на микроскопе «OlympusCX-41».

Статистическая обработка полученных данных была выполнена с помощью пакета прикладных программ STATISTICA 8.0. В качестве описательных статистик для количественных величин применяли среднее значение (М) и стандартное отклонение (σ (±)). Межгрупповое сравнение проводили с применением критерия Стьюдента. Различия считали статистически значимыми р < 0,05.

Результаты

При изучении спаечного материала, полученного в ходе оперативного вмешательства, было обнаружено, что тазовые перитонеальные спайки представляли собой массивы соединительной ткани со слабовыраженными признаками интерстициального отека, частично покрытые мезотелием. По консистенции спайки рыхлые и разволокненные с очаговыми фибриноидными изменениями и гиалинозом. Покровный мезотелий состоял из уплощённых клеток кубической формы либо формировал подобие «подушек», представленных пролиферирующими мезотелиоцитами. В составе спаек визуализировались тонкие нервные стволики, очаговая слабо либо умеренно выраженная, в основном периваскулярная мононуклеарная инфильтрация. В некоторых наблюдениях в состав ткани спайки входили также адипоциты, образующие очаговые скопления или полностью прорастающие спайку. В толще спайки также обнаруживались пучковые разрастания сосудов микроциркулярного русла, представляющие собой преимущественно артериолы с нарушением архитектоники эндотелиоцитов, что проявлялось в перпендикулярном их расположении относительно интимы сосудов. Кровеносные капилляры были, как правило, полнокровны, в некоторых случаях в них наблюдались явления стаза и сладжирования эритроцитов.

При ИГХ исследовании спаечного материала установлено, что CD4+ Т-лимфоциты располагаются в виде полосовидных инфильтратов и очаговых периваскулярных скоплений (рис. 1А). CD8+Т-лимфоциты располагались в основном субмезотелиально, в виде периваскулярных скоплений (рис. 1Б).

Рисунок 1. Фрагмент перитонеальной спайки.
Примечания: А – полосовидные инфильтраты из CD4+ Т-лимфоциты. ИГХ. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.100×. Б – субмезотелиально расположенные CD8+ Т-лимфоциты. ИГХ. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 100×.
Figure 1. Fragment of peritoneal adhesions.
Notes: A – stripe infi ltrates from CD4 + T-lymphocytes. IHC. Staining with hematoxylin and eosin. Uv. 100×. B – submesothelial CD8 + T-lymphocytes. IHC. Staining with hematoxylin and eosin. Uv. 100×.

При ИГХ исследовании спаечного материала установлено, что CD138+ располагались преимущественно периваскулярно, в составе мононуклеарных инфильтратов (рис. 2).

Рисунок 2. Фрагмент перитонеальной спайки c очаговыми скоплениями CD138+ клеток в ткани спайки. ИГХ. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 100×.
Figure 2. Fragment of peritoneal adhesion with focal accumulations of CD138 + cells in adhesion tissue. IHC. Staining with hematoxylin and eosin. Uv. 100×.

Необходимо отметить, что в ткани спаек не обнаружено CD20+В-лимфоцитов.

При морфометрическом анализе субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток ткани спаек у женщин со спаечным процессом в малом тазу и перитонельной брюшины у здоровых женщин были получены данные, представленные в табл.1.

Таблица / Table 1

Сравнительный анализ экспрессии иммунокомпетентных клеток в ткани спаек и перитонеальной брюшине
Comparative analysis of the expression of immunocompetent cells in adhesion tissue and peritoneal peritoneum

В ткани спаек по сравнению с париетальной брюшиной визуализировалось более высокое статистически значимое количество CD4+Т-лимфоцитов, CD8+Т-лимфоцитов, отсутствие содержания CD20+-Влимфоцитов. Количество CD138+ клеток было несколько повышено, однако не достигало статистической значимости.

Обсуждение

Иммунной системе отведена основная роль с позиции регуляции эксплицированности воспаления и его исхода [15]. Известно, что именно функциональное состояние клеточного и гуморального звеньев иммунитета во многом определяет течение и исход воспалительного процесса в брюшной полости [16].

Настоящее исследование посвящено изучению особенностей фенотипического состава иммунокомпетентных клеток в ткани спаек у женщин со спаечным процессом в малом тазу I – II степени.

Иммунный компартмент брюшины – это микросреда с определенным репертуаром различных субпопуляций лимфоцитов, запускающих каскад молекулярных процессов [17]. Согласно современным представлениям, ведущее место в инициировании иммунологической реакции принадлежит активации пула антигенраспознающих CD4+Тхелперных клеток, предопределяющих характер и интенсивность иммунного ответа [18]. Как показали результаты нашего исследования, в ткани спайки по сравнению с париетальной брюшиной регистрируется более высокое статистически значимое количество CD4+Т-лимфоцитов. Полученные нами данные близки к результатам экспериментальной работы Doo Ryeon Chung et al. [13], в которой показано, что CD4+Т-лимфоциты играют значимую роль в развитии спаечного процесса. Провоспалительный цитокин IL-17, вырабатываемый преимущественно активированным CD4+Т хелперами, индуцируя высвобождение СХС-хемокинов, макрофагов-воспалительного белка-2, цитокин-индуцируемого хемоаттрактанта нейтрофилов, опосредованно влияет на развитие послеоперационного адгезиогенеза. Нами установлено, что выраженность спаечного процесса напрямую зависит от количественного состава пула CD4+Т-лимфоцитов. Полученные данные свидетельствует о значимой роли иммунокомпетентных клеток в процессе формирования послеоперационных спаек.

CD8+T-лимфоциты являются основной эффекторной единицей клеточно-опосредованного иммунитета и играют существенную роль в формировании естественной или индуцированной антигеном (оперативным вмешательством) иммунологической толерантности. Осуществляя лизис мишеней, CD8+T-лимфоциты обеспечивают генетическое постоянство внутренней среды организма. В настоящем исследовании в ткани спайки по сравнению с париетальной брюшиной регистрировалось более высокое статистически значимое количество CD8+Т-лимфоцитов. Данный факт не обнаружен нами в какой-либо аналогичной работе и нуждается в дополнительном изучении. Однако, основываясь на современных представлениях о механизмах иммунного ответа в постоперационном периоде, можно предположить, что нарушение функции Т-супрессорного звена иммунитета подавляет рекрутинг других иммунологически активных клеток (преимущественно моноцитов и нейтрофилов) в очаг перестройки сосудистого русла. В свою очередь последующее нарушение продукции медиаторных молекул, пептидных ростовых и антиростовых факторов, экспрессии лейкоцитарных и тромбоцитарных адгезивных молекул служит дополнительным фактором патологического адгезиогенеза.

Индекс иммунорегуляции (соотношение CD4+:CD8+) является показателем гармоничного функционирования иммунной системы и в норме составляет 1:2. В настоящем исследовании у пациенток со спаечным процессом соотношение CD4:CD-8 в ткани спаек составило 0,6, что указывает на недостаточность местного иммунного ответа. Сдвиг соотношения влево происходил за счёт снижения количества Т-хелперов и повышения количества Т-супрессоров.

CD20+В-лимфоциты, обладающие регуляторными функциями, обнаруживаются в тканях при ряде воспалительных и аутоиммунных заболеваний, где их роль сводится преимущественно к угнетению патологических процессов. В норме СD20+ В-лимфоциты дифференцируются в плазматические клетки и синтезируют иммуноглобулины, конечным этапом действия которых является связывание и нивелирование антигена. В настоящем исследовании установлено отсутствие CD20+ В-лимфоцитов в ткани спаек, что свидетельствует о недостаточности функциональной активности гуморального звена иммунитета. Данный факт не обнаружен нами в какой-либо аналогичной работе и нуждается в дополнительном изучении.

CD138+ (синдекан-1) – универсальный маркер плазматических клеток. Установлено, что СD138+ непосредственно участвует в развитии межклеточных связей и блокирует проникновение клеток в коллаген. Наряду с этим, учитывая роль СD138+в присоединении к клеткам эпидермальных факторов роста, отсутствие данной молекулы на мембране клеток может снижать их восприимчивость к биорегулирующему действию аутентичных цитокинов. В настоящем исследовании в ткани спайки по сравнению с париетальной брюшиной регистрировалось более высокое количество CD138+, однако не достигающее статистической значимости. Полученный результат, на наш взгляд, свидетельствует о продолжающейся медленной регенерации ткани с транзиторной манифестацией иммуногистохимических маркеров воспаления.

Заключение

Таким образом, у пациенток со спаечным процессом органов малого таза на локальном уровне выявлен значительный дисбаланс иммнорегуляторных процессов, характеризующийся нарушением функциональной активноти клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Доказано, что преимущественное влияние на процесс адгезиогенеза оказывает Т-клеточное звено иммунитета. С целью профилактики послеоперационного спаечного процесса в малом тазу у пациенток репродуктивного возраста необходимо применять иммуномодулирующую терапию (дезоксирибонуклеат натрия) в раннем послеоперационном периоде, что позволит улучшить результаты хирургического лечения и является патогенетически обоснованным.

Список литературы

1. Шатова Е.С. Современный подход к проблеме спаечной болезни у женщин репродуктивного возраста. // Журнал акушерства и женских болезней. – 2013. – Т. 62. – № 1. – С. 90-101. eLIBRARY ID: 19409693

2. Доброхотова Ю.Э., Гришин И.И., Гришин Опыт применения противо А.И. спаечного барьера у пациенток с трубно-перитонеальным фактором бесплодия. // РМЖ. Мать и дитя. – 2017. – Т. 25. – № 15. – С. 1141-1143. eLIBRARY ID: 30309182

3. Беженарь В.Ф., Айламазян Э.К., Байлюк Е.Н., Цыпурдеева А.А., Поленов Н.И. Этиология, патогенез и профилактика спайкообразования при операциях на органах малого таза. // Российский вестник акушера-гинеколога. – 2011. – Т. 11. – № 2. – С. 90-101. eLIBRARY ID: 18965970

4. Беженарь В.Ф., Цыпурдеева А.А., Байлюк Е.Н. Спаечная болезнь органов малого таза у гинекологических больных: от патогенеза к профилактике. // Онкогинекология. – 2014. – №4. – С.68–74. eLIBRARY ID: 22752601

5. Бурлев В.А., Дубинская Е.Д. Фенотипические особенности недифференцированных форм дисплазии соединительной ткани у пациенток с тазовыми перитонеальными спайками. // Проблемы репродукции. – 2012. – Т. 18. – № 2. – С. 8-14. eLIBRARY ID: 18022550

6. Лазаренко В.А., Конопля А.И., Липатов В.А., Гомон М.С., Ефременков А.М. К вопросу о роли иммунной системы в развитии спаечного процесса брюшной полости (обзор литературы) // Innova. – 2016. – № 4(5). – С. 29-33. eLIBRARY ID: 35550936

7. Рыбалка А.Н., Сулима А.Н., Давыдова А.А., Яковчук Е.К., Аникин С.С. Особенности экспрессии провоспалительных цитокинов в ткани тазовых спаек у женщин с хроническими воспалительными заболеваниями органов малого таза. // Juvenis Scientia. – 2016. – № 3. – С. 29-31. DOI 10.15643/jscientia.2016.3.101.

8. Kuraoka S, Campeau JD, Nakamura RM, diZerega GS. Modulation of postsurgical macrophage function by early postsurgical polymorphonuclear leukocytes. // J Surg Res. – 1992. – V. 53(3). – P. 245-50. doi: 10.1016/0022-4804(92)90042-x

9. Магомедов М.А. Местная клеточная регуляция в образовании послеоперационных спаек при перитоните // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. – 2004. – №6. – С. 9-11. eLIBRARY ID: 35540526

10. Торгашина А.В., Быковская С.Ю., Соловьев С.К., Насонов Е.Л. Т-регуляторные клетки при системной красной волчанке и ревматоидном артрите. // Научно-практическая ревматология. – 2009. – Т. 47. № 3. – С. 50-59. eLIBRARY ID: 20342153

11. Diani M, Altomare G, Reali E. T cell responses in psoriasis and psoriatic arthritis. // Autoimmun Rev. – 2015. – V. 14(4). – P. 286-92. DOI: 10.1016/j.autrev.2014.11.012

12. Griveas I, Fleva A, Karanikas E, Gogos K, Sakellariou G. CD4/CD8 T-cell ratio in peritoneal dialysis effl uents predicts the outcome of peritonitis in patients undergoing continuous ambulatory peritoneal dialysis. // Artif Organs. – 2009. – V. 33(12). – P. 1091-5. DOI: 10.1111/j.1525-1594.2009.00802.x

13. Chung DR, Chitnis T, Panzo RJ, Kasper DL, Sayegh MH, Tzianabos AO. CD4+ T cells regulate surgical and postinfectious adhesion formation. // J Exp Med. – 2002. – V. 195(11). – P. 1471-8. DOI: 10.1084/jem.20020028

14. Dong L, Zheng X, Wang G. Peritoneal adhesions induce Th 17/Tregimbalance in mice. // Int J Clin Exp Pathol. – 2018. – V. 11(9). – P.4352-4362. PMID: 31949832; PMCID: PMC6962961.

15. Лебедева О.П., Пахомов С.П., Калуцкий П.В., Карпов П.А., Чурносов М.И., Попов В.Н. Роль Толл-подобных рецепторов врожденного иммунитета в развитии акушерской и гинекологической патологии. // Иммунопатология, аллергология, инфектология. – 2012. – № 1. – С. 19-26. eLIBRARY ID: 21165785

16. Лазаренко В.А., Конопля А.И., Липатов В.А., Гомон М.С., Ефременков А.М. К вопросу о роли иммунной системы в развитии спаечного процесса брюшной полости (обзор литературы). // Innova. – 2016. – № 4 (5). – С. 29-33. eLIBRARY ID: 35550936

17. Кулаков В.И., Волков Н.И., Беспалова Ж.В. Иммунокомпетентные клетки в эндометрии пациенток с бесплодием и наружным генитальным эндометриозом. // Журнал акушерства и женских болезней. – 2003. – Т. 52. № 4. – С. 12-16. eLIBRARY ID: 9231996

18. Бабаева А.Г. Регенерация и система иммуногенеза. – М. Медицина, 1985.


Об авторах

Г. А. Пучкина
Медицинская академия им. С.И. Георгиевского; Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского
Россия

Пучкина Галина Анатольевна, ассистент кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии № 1

Симферополь, Республика Крым



А. Н. Сулима
Медицинская академия им. С.И. Георгиевского; Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского
Россия

Сулима Анна Николаевна, д.м.н., профессор кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии № 1

Симферополь, Республика Крым



А. А. Давыдова
Медицинская академия им. С.И. Георгиевского; Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского
Россия

Давыдова Александра Александровна, к.м.н., доцент кафедры патологической анатомии с секционным курсом № 1

Симферополь, Республика Крым



Для цитирования:


Пучкина Г.А., Сулима А.Н., Давыдова А.А. Иммунокомпетентные клетки в ткани спаек пациенток со спаечным процессом в малом тазу. Медицинский вестник Юга России. 2021;12(3):72-77. https://doi.org/10.21886/2219-8075-2021-12-3-72-77

For citation:


Puchkina G.A., Sulima A.N., Davidova A.A. Immunocompetent cells in the tissue of adhesives of patients with adhesion process in the small pelvis. Medical Herald of the South of Russia. 2021;12(3):72-77. (In Russ.) https://doi.org/10.21886/2219-8075-2021-12-3-72-77

Просмотров: 86


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2219-8075 (Print)
ISSN 2618-7876 (Online)