Ассоциация однонуклеотидных вариантов генов CLOCK (rs1801260) и судорожных припадков после отмены алкоголя

Введение

Чрезмерное употребление алкоголя является одним из самых распространённых факторов риска для развития различных заболеваний. Несмотря на позитивную динамику снижения роста продаж алкогольных напитков в 2,5 раза за последние 10 лет, число пациентов с впервые поставленными диагнозами F10.0-F10.9 (психические и поведенческие расстройства, вызванные употреблением алкоголя) на конец 2022 г. составило 37,0 пациента на 100 тыс. населения. Стоит отметить, что из них на алкогольные психозы приходится 8,8 пациентов на 100 тыс. населения¹.

Одним из состояний, встречающихся у всех пациентов с алкогольной зависимостью средней стадии, является синдром отмены алкоголя. Под синдромом отмены алкоголя (СОА) понимают симптомокомплекс соматических (повышение артериального давления, температуры тела, потливость, тошнота, рвота и т.д.) и психических (дисфория, нарушение сна, тревога и т.д.) осложнений [1], проявляющихся во II и III стадии синдрома алкогольной зависимости после резкого и значительного снижения дозы или прекращения употребления спиртных напитков [2]. СОА может протекать в двух видах: неосложнённом (ограничивающимся соматической симптоматикой с нарушением эмоционально-волевой сферы психической деятельности) и осложнённом (включающим в себя алкогольный галлюциноз, алкогольный делирий и алкогольные судороги) [3].

Впервые такое понятие, как «алкогольные судороги», было введено немецким психиатром Эмилем Креплиным [4]. Судорожные припадки (СП), связанные с употреблением этилового спирта, преимущественно возникают у мужского пола [5], обычно спустя 6–72 часов с последнего употребления, зачастую без других проявлений СОА, состоящих из генерализованных тонико-клонических припадков с отсутствием парциального характера [6]. Необходимо подчеркнуть, что в отличие от «классических» эпилептических припадков алкогольные не имеют закономерной смены фаз, они кратковременны и проявляются в меньшей степени, при этом память о приступе сохраняется [2]. К провоцирующим/предикторным факторам «алкогольных судорог» относят: пожилой возраст; черепно-мозговые травмы (ЧМТ); инфекции вирусного и бактериального происхождения; нарушения функций со стороны других органов, в особенности наличие неврологических заболеваний; обезвоживание; гипонатриемия или гипокалиемия; повышенный уровень АСТ и ГГТ; низкие показатели тромбоцитов; имеющиеся в анамнезе ранее перенесённые приступы и другие осложнения СОА [6][7]. Однако не у всех пациентов с синдромом зависимости от алкоголя при СОА возникают СП.

Одной из возможных причин развития СП у пациентов с синдромом алкогольный зависимости может быть нарушения циркадного ритма, регулирующийся основным гормоном эпифиза — мелатонином. Было доказано, что циркадный мелатонин совместно с другими системами (молекулярными, клеточными, энергетическими) регулирует эпигенетические процессы в нейронах. Мелатонин влияет на активность многих генов в центральной нервной системе (ЦНС): PER (Period Circadian Protein), BMAL (Brain and Muscle Arnt-Like protein.), CRY (Cryptochrome) и CLOCK (Circadian Locomotor Output Cycles Kaput) [8,9]. В проведённом Ефремовым И.С. и соавт. исследовании была обнаружена аллель С и генотип СТ полиморфного гена CLOCK (rs1801260). Полученные данные указывали на высокий риск нарушения сна у пациентов, страдающих алкогольной зависимостью, ассоциированный с CLOCK (rs1801260) [10]. Имеющиеся сведения о влияние мелатонина на эпилептическую активность, нарушение сна у пациентов с алкогольной зависимостью и данные о роли гена CLOCK (rs1801260) в нарушении циркадного ритма позволяют предположить об их синергическом участии в развитие СП, что требует более подробного изучения ассоциации однонуклеотидных вариантов гена CLOCK (rs1801260) и СП при СОА.

Цель исследования — изучить ассоциацию однонуклеотидных вариантов гена CLOCK (rs1801260) и судорожных припадков после отмены алкоголя.

Материалы и методы

Было проведено лонгитюдное исследование пациентов с синдромом зависимости от алкоголя, с судорожными припадками после приёма алкоголя и без таковых. Для формирования выборки были разработаны критерии включения, невключения и исключения. Критерии включения: наличие верифицированного диагноза F10.2 «Синдром зависимости от алкоголя», соответствующего критериям МКБ-10; наличие в период госпитализации синдрома отмены алкоголя, осложнённого судорожными припадками; возраст от 18 до 55 лет; не менее 7 дней с момента госпитализации; период воздержания от употребления алкоголя не менее 7 и не более 30 дней. Критерии невключения: наличие на момент обследования синдрома отмены алкоголя; наличие у пациента зависимости от другого психоактивного вещества, кроме алкоголя и никотина; невозможность проведения интервьюирования по другим причинам; наличие в анамнезе судорожных припадков, не связанных с синдромом отмены алкоголя, предшествовавших алкоголизму; наличие коморбидной психической патологии: органические, включая симптоматические, психические расстройства (F00-F09); расстройства шизофренического спектра (F20-F29); аффективные расстройства (F30-39); умственная отсталость (F70-F79); наличие соматической патологии в стадии обострения; наличие острого инфекционного заболевания; наличие в анамнезе черепно-мозговых травм; наличие выраженных когнитивных нарушений; выявление судорожных припадков, не связанных с употреблением алкоголя в течение года после включения. Критериями исключения из исследования стали отказ от участия в исследовании, выявление в процессе клиническое интервьюирование критериев невключения.

Согласно обозначенным критериям выборки, были проанализированы 399 пациентов (83 женщины (21%). 316 мужчин (79%)). Средний возраст пациентов составил 41,52±8,42 лет. Пациенты были разделены на 2 группы. Основная группа (пациенты, которые перенесли судорожный приступ в условиях стационара) — 108 пациентов, 12 женщин (11%), 96 мужчин (89%), и группа сравнения — 291 пациент (71 (25%) женщина, 220 (75%) мужчин). Обследование пациентов проходило с февраля 2019 г. по август 2023 г.

У всех пациентов были взяты образцы венозной крови в количестве 10 мл с помощью вакуумных систем Vacutainer для молекулярно-генетического исследования, образцы были заморожены (-20ºС) и транспортированы в центр молекулярной медицины УУНиТ (г. Уфа), где было проведено генотипирование. Пробоподготовка образцов крови для выделения ДНК осуществлялась реагентом для предварительной обработки цельной периферической крови «Гемолитик» (АмплиСенс®). Экстракция ДНК проводилась набором «Рибо-ПРЕП» (АмплиСенс®). Генотипирование генов CLOCK (rs1801260) проводили с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (RT-PCR) на амплификаторе RotorGene 6000 (Quigen, Германия) с помощью набора реагентов производства компании Синтол (г. Москва). Было проведено сравнительное генетическое обследование двух групп пациентов: первая группа — пациенты с синдромом зависимости от алкоголя с судорожными припадками после отмены алкоголя (n=108); вторая группа — пациенты с синдромом зависимости от алкоголя без судорожных припадков после отмены алкоголя (n=291).

Статистическая обработка проводилась с применением Microsoft Excel, IBM SPSS Statistics 26. При проведении частотного анализа использовался критерий χ² (Хи-квадрат Пирсона), а также оценивался показатель отношения шансов для каждого из генотипов. Различия признавали статистически достоверными при уровне значимости р<0,05.

Исследование соответствует нормам современных этических стандартов согласно Хельсинской декларации ВМА, одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России (Протокол Nº3 от 06.05.2021 г.).

Результаты

При проведении частотного анализа встречаемости судорожных припадков после отмены алкоголя у носителей различных генотипов были получены статистически значимые отличия в носительстве гена CLOCK (p= 0,019). Однако носители генотипа СС намного реже встречались судорожные припадки (OR=0,12), чем у носителей генотипа ТТ (OR=1,557) и ТС (OR=0,981). Кроме того, наличие аллели Т было ассоциировано с судорожными припадками после отмены алкоголя, наиболее проявляющимися в гомозиготном варианте. Результаты статистического анализа представлены в таблице 1.

Обсуждения

Обнаружение взаимосвязи вариантов гена CLOCK и судорожных припадков после отмены алкоголя дополняет уже представленные в литературе данные, так как ассоциация циркадных ритмов с припадками различного генеза широко описывается в исследованиях. Авторами показана взаимосвязь возбудимости нейронов и циркадных ритмов, реализуемая в первую очередь через активность рецепторов ГАМК, которая регулирует активность супрахиазматического ядра гипоталамуса [6][7]. С циркадным ритмом также ассоциированы судорожные припадки иного генеза, не вызванные отменой алкоголя, в частности эпилептические припадки, или, например, Udaya Seneviratne et al. (2017) указывают на роль цикла сон-бодрствование в возникновении психогенных неэпилептических припадков, патогенез которых на настоящий момент не изучен [4]. Таким образом, мы можем заподозрить участие гена CLOCK в регуляции судорожной активности без привязки к конкретному генезу. Это делает изучение судорожных припадков после отмены алкоголя ещё более актуальной задачей для получения фундаментальных данных о судорожных припадках, а также дальнейшей персонификации помощи при судорогах.

Вывод

Наличие в генотипе аллели Т гена CLOCK ассоциировано с судорожными припадками после отмены алкоголя. Причём у носителей гомозиготного генотипа шанс встретить судорожные припадки выше, чем у носителей гомозиготного.

Соответствие принципам этики.

Исследование соответствует нормам современных этических стандартов согласно Хельсинской декларации ВМА, одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России (Протокол Nº3 от 06.05.2021 г.).